研磨儀搭配植物RNA快速提取試劑盒提取雞肉組織 返回

　　一 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模嚎焖偬崛?dòng)物組織中的總RNA(18S,28S；離心吸附柱不吸附5S)

　　二 、實(shí)驗(yàn)器材及試劑：研磨儀，離心管，移液槍?zhuān)娪静勰z成像等；無(wú)水乙醇，液氮，瓊脂糖。

　　三、 實(shí)驗(yàn)材料：雞肉組織。

　　四、 實(shí)驗(yàn)步驟

　　1）雞肉組織

　　2）鮮組織用解剖刀迅速切成小碎離心管中，加入小號(hào)研磨珠，將管子蓋嚴(yán)后放入液氮中冷凍 ，設(shè)置參數(shù)，點(diǎn)擊運(yùn)行即可開(kāi)始研磨。

　　3）取適量組織細(xì)粉轉(zhuǎn)入裝有組織裂解液RLT的離心管中， 用手劇烈振蕩若干秒，充分裂解。用帶鈍針頭的一次性注射器抽打裂解物若干次或直到得到滿(mǎn)意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿若干秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。

　　4）將勻漿后裂解物離心，沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物， 將裂解物上清小心轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。

　　5）接操作步驟項(xiàng)下3。

　　6）較精確估計(jì)裂解物(上清)體積，加入等體積的乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇?。?，此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀，但是不影響提取過(guò)程，立即吹打混勻，不要離心。

　　7）立刻將混合物加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）離心60秒，棄掉廢液。

　　8）加去蛋白液RW1，室溫放置幾秒，離心30秒，棄掉廢液。

　　9）如果DNA殘留明顯，可在加入RW1后室溫放置幾分鐘再離心。

　　10）加入漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇?。?，離心30秒，棄掉廢液。加入漂洗液RW,重復(fù)一遍。

　　11）將吸附柱RA放回空收集管中離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

　　12）取出吸附柱RA，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free water， 室溫放置1分鐘，離心1分鐘。

　　13）如果預(yù)期RNA產(chǎn)量>30μg,加30-50μl RNase free water重復(fù)步驟8, 合并兩次洗脫液，或者使用第一次的洗脫液加回到吸附柱重復(fù)步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。

　　14）洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高，分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%,但是濃度要低，用戶(hù)根據(jù)需要選擇。

　　五 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：提取的雞肉組織RNA點(diǎn)樣量為1ul，雞肉組織RNA兩個(gè)條帶亮度相當(dāng)，提示出現(xiàn)降解。